Среда «ПерСелект», 90%

Растворы «ПерСелект» 90%, 45% предназначены для выделения обогащенных фракций клеток млекопитающих из суспензий и взвесей методом градиентного разделения.

Данный продукт предназначен для исследовательских целей.

Основные характеристики препарата

Кат. № Э53111-110

Раствор «ПерСелект»-90% представляет собой 90% (v/v) исходной суспензии неорганического коллоидного раствора уравновешенного 10% (v/v) изотонического раствора с добавлением фенолового красного. Удельная плотность раствора «ПерСелект»-90% — 1,105 г/см3.

Кат. № Э55111-110

Раствор «ПерСелект»-45% представляет собой 45% (v/v) исходной суспензии неорганического коллоидного раствора уравновешенного 55% (v/v) изотонического раствора с добавлением фенолового красного. Удельная плотность раствора «ПерСелект»-45% — 1,052 г/см3.

В состав растворов «ПерСелект» входит человеческий сывороточный альбумин, протестированный на наличие поверхностного антигена гепатита В, на антитела к вирусам гепатита С, ВИЧ-1 ВИЧ-2, на антитела к возбудителю сифилиса.

Растворы «ПерСелект» асептически приготовлены методом стерилизующей фильтрации.

Вскрытие флакона и дальнейшую работу с раствором следует проводить в стерильных условиях!

Протокол применения

Растворы «ПерСелект» 45% и 90% могут применяться как по отдельности (одноступенчатый градиент), так и в комбинации (двуступенчатый градиент) в зависимости от плавучей плотности и требуемой степени очистки селектируемой фракции клеток. Для получения лучших результатов градиент готовят непосредственно перед использованием.

Приготовление одноступенчатого градиента «ПерСелект» 90%; 45%:

1. На дно центрифужной конической пробирки (15мл) помещают 1-2мл раствора «ПерСелект».

2. 1-3 мл разделяемой суспензии клеток ~106кл/мл мягко наслаивают на раствор «ПерСелект» с образованием одноступенчатого градиента плотности.

3. Загруженный градиент подвергают центрифугированию при необходимом числе оборотов и времени в зависимости от свойств исходной суспензии и целевой фракции выделяемых клеток/частиц.

4. Целевую фракцию клеток/частиц подвергают отмывке от раствора «ПерСелект» и подвергают процедурам дальнейшей очистки/обогащения.

Приготовление двуступенчатых градиентов «ПерСелект» 90%, 45%:

1. Градиент готовят из 1–2 мл 90% раствора на который наслаивают 1‒2 мл 45% раствора, после чего готовый градиент уравновешивают в СО2-инкубаторе при 5‒6% СО2при температуре 37° С.

2. Аккуратно мягко наслаивают 1-2мл суспензии клеток на поверхность «ПерСелект»-45%. Не следует увеличивать количество разделяемой суспензии по отношению к объему градиентных растворов больше чем 1:2, это может привести к некачественному разделению.

3. Градиент центрифугируют при необходимом числе оборотов и времени в зависимости от свойств исходной суспензии и целевой фракции выделяемых клеток/частиц (для очистки клеток высокой плотности, напр. сперматозоидов, центрифугируют 700g в течение 20 минут).

4. Изолируют целевую фракцию клеток/частиц в интерфазах градиента или на дне пробирки (сперматозоиды).

5. Осадок клеток ресуспендируют в 5 мл среды/раствора для отмывки, хорошо перемешивают, и центрифугируют при 300g в течение 10 минут. При необходимости процедуру отмывки клеток/частиц повторяют еще 1-2 раза.

6. Удаляют надосадочную жидкость. Готовят финальную суспензию целевой фракции клеток/частиц и, при необходимости, и подвергают процедурам дальнейшей очистки/обогащения.

Срок годности, условия хранения и транспортировки

Срок годности градиентных растворов «ПерСелект»-90%, 45% –6 месяцев с даты изготовления. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Хранить и транспортировать при температуре от 2 до 8°С в защищенном от света месте.

Не замораживать!

Неиспользованный остаток нагретой среды не подлежит повторному нагреванию и использованию.

Растворы «ПерСелект» 90%, 45% должны быть использованы в течение 7 дней с момента первого вскрытия флакона.