Среда «ГибриС-8»
Бессывороточная среда ГибриС-8 98 мл
с добавкой 2 мл.
Среда ГибриС-8 – это бессывороточная среда для культивирования индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC) и эмбриональных стволовых клеток (ES) без использования фидерного слоя. Среда содержит минимальный набор компонентов, необходимых для выживания, пролиферации и поддержания недифференцированного плюрипотентного состояния стволовых клеток в течение длительной серии пассажей. В состав ГибриС-8 не входят альбумин, фетуин и компоненты неопределенного состава (например, гидролизаты растатительных или животных белков).
Данный продукт предназначен для исследовательских целей.
Состав среды
Полная среда ГибриС-8 представляет собой смесь минеральных солей, аминокислот, глюкозы, витаминов, антиоксидантов и рекомбинантных человеческих белков, растворенную в деионизованной воде.
Среда содержит pH-индикатор — феноловый красный.
Способ применения
Приготовление полной среды ГибриС-8:
1. Вскрыть флакон со средой в асептических условиях.
2. Внести в среду Добавку к среде ГибриС-8 (50x), разбавив ее в отношении 1:50.
3. Внести в среду L-Глутамин в конечной концентрации 365 мг/л.
4. Внести в среду антибиотики (при необходимости).
Хранить полную среду при температуре от +2 до +8°C в течение не более 2-х недель.
Хранить среду при температуре от +2 до +8 оС.
Хранить добавку при температуре от -15 до -20 оС.
Срок годности: 1 год.
Общие рекомендации по культивированию iPSC в Гибрис-8
ГирбиС-8 позволяет культивировать стволовые клетки на различных коммерчески доступных белковых покрытиях для культурального пластика: экстракт белков внеклеточного матрикса из саркомы Энгельберта-Холма-Сворма (например, Corning Matrigel) или рекомбинантный человеческий витронектин.
Стволовые клетки, культивируемые в ГибриС-8, можно пассировать без контакта с сывороткой, используя трипсин и ингибитор трипсина из соевых бобов. Помимо этого, для пассирования можно использовать безферментный протокол, основанный на обработке клеток раствором Версена.
Для длительного рутинного культивирования в среде ГибриС-8 мы рекомендуем пассировать стволовые клетки небольшими агрегатами (диаметром 50 – 200 мкм), когда их колонии покрывают 60 – 70% доступной площади или когда в культуре вырастают очень крупные колонии с многослойной структурой в центре. Оптимальное количество дней между пассажами варьирует от 3 до 8. В соответствии с желаемым графиком ведения культуры рекомендуется разбавлять суспензию клеток при пассировании в отношениях от 1:3 до 1:12. Допускается появление в культуре небольшого количество дифференцированных клеток, которые не требуют удаления. Необходимо менять среду каждый день.
ГибриС-8 также поддерживает рост культур стволовых клеток в течение 2 – 3 пассажей при пассировании одиночными клетками с добавлением в среду на 1 – 2 сутки ингибитора протеинкиназ типа ROCK (Y-27632). Однако в этом случае существенно возрастает вероятность дифференцировки всех или большинства клеток, нарушений в кариотипе и снижения интенсивности пролиферации и выживаемости клеток.
Результаты тестирования среды ГибриС-8 в условиях модельного эксперимента
Для тестирования среды ГибриС-8 мы использовали культуру iPSC. Клетки культивировались в T25-флаконах, покрытых Corning Matrigel, при 5% CO2, 37°C и 95% влажности. Клетки пересевались агрегатами каждые 7 – 8 дней. При пересеве суспензия клеток разбавлялась в отношении 1:10. Нами было показано, что ГибриС-8 поддерживает пролиферацию iPSC в течение минимум 8 пассажей. При этом за 7 – 8 дней после посева площади исходных колоний iPSC (наблюдаемые через 24 часа после посева) увеличивались в 10 – 50 раз. В ходе тестирования мы не наблюдали признаков дифференцировки клеток.
